Standardvorbereitung:
Bereiten Sie einen gemischten Standard auf Lager vor, indem Sie genau (Magnesium ±0.01) mg ungefähr 10 jedes kavalactone Referenzstandards in eine Maßflasche 10-mL wiegen. Addieren Sie 7,0 ml Methanol und sonorisieren Sie, bis aufgelöst. Verdünnen Sie zum Volumen mit Methanol und mischen Sie.
Mitteilung: Wechselweise bereiten Sie einen kavain Vorratstandard auf gleiche Weise vor und verwenden Sie die kavalactone Wartefaktoren, um gegen quantitativ zu bestimmen.
Verdünnen Sie den Vorratstandard, um ein Minimum einer Vierpunktstandardkurve zu schaffen. Vorgeschlagene Standardverdünnungen des Vorrates sind 1:10, 1:25 und 1:100 unter Verwendung des Methanols.
Mitteilung: Speichern Sie Standards bei gekühlten Temperaturen (0 - 5°C). Kavalactones vermindern schnell nach 48 Stunden. Vorbereitung von neuen Referenzstandards vor jeder Analyse wird empfohlen.
Apparat
· Kalibrierte analytische Balance genau zu Magnesium ±0.01
· Flasche, volumetrisch, Klasse A, sortierte Größen
· Phiolen, Chromatographie mit Kappe
· Hochleistungs-Flüssigchromatographie-System, wie in USP-Kapitel beschrieben. Überprüfen Sie und dokumentieren Sie diesen Apparat, Software, und Subsysteme genügen Leistungsanforderungen für Installations-Qualifikation/Operations-Qualifikation (IQ/OQ).
· Filtern Sie, 0,45 µm, Nylon Gelman Acrodisc (P/N 4426), Polypropylen Whatman Puradisc™ (Katze. Nr. 6788-2504), Glas Whatman GD/X (Katze. Nr. 6894-2504) oder gleichwertiges Sonicator
· Spalte, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 Millimeter (Katze. Nein BA99S05-2546WT). Gleichwertige Spalte, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (Katze. Nein JH08S04-2546WT).
Reagenzien
· Wasser, HPLC-Grad oder Nanopure
· Methanol, HPLC-Grad
· Acetonitril, HPLC-Grad
· Phosphorsäure, ACS-Reagensgrad
Probenaufbereitung:
Pflanzliches Material
Wiegen Sie genau (± 0.1mg) mg ungefähr 750 des fein gemahlenen Stammes, der Schale oder des Wurzelmaterials.
Setzen Sie das Material in eine Maßflasche 50-mL zusammen mit 40 ml Methanol/Wasser (70/30). Sonorisieren Sie für 60 Minuten bei Zimmertemperatur.
Lassen Sie Flasche zur Raumtemperatur abkühlen und zum Volumen mit Methanol/Wasser (70/30) verdünnen und mischen.
Filter- und Platzprobe in eine HPLC-Phiole und -kappe.
Pulver und weicher Auszug (Paste)
Wiegen Sie genau (± 0,1 mg) mg ungefähr 100 des Auszuges in eine Maßflasche 50-mL. (Das 100 mg-Gewicht basiert nach einem kavalactone 50-60% Inhalt im Auszug.) Mitteilung: Homogenisieren Sie sorgfältig Auszug, bevor Sie probieren. Dieses wird vollendet, indem man den Auszug in einen Behälter legt, der in einem 60° - heißes Wasserbad 80° C untergetaucht wird, bis freifließend.
Addieren Sie 40 ml Methanol und sonorisieren Sie für 10 Minuten, oder bis alle Körper haben sich aufgelöst.
Lassen Sie Flasche zur Raumtemperatur abkühlen und zum Volumen mit Methanol verdünnen und mischen.
Filter- und Platzprobe in eine HPLC-Phiole und -kappe.
Pulver-Proben
Kava-Auszug ist häufig gemischt oder auf verschiedene Fördermaschinen spraygetrocknet. Um Pulverproben erfolgreich zu prüfen, ist es notwendig einen Probenaufbereitungsschritt zu entwickeln der die kavalactones von der Fördermaschine sich erholt. Dieses kann vollendet werden, indem man zuerst mit reinem Methanol oder Wasser extrahiert.
Chromatographische Bedingungen:
Spalte: YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 Millimeter
Spalten-Temperatur: 40°C
Strömungsgeschwindigkeit: 0,6 mL/min für YMCbasic; 1,0 mL/min für J'Sphere
Mobile Phase: isocratic 0,1% Phosphorsäure: Isopropylalkohol: Acetonitril (64:16: 20 v/v)
Entdeckung: 220 Nanometer (246 Nanometer wechselweise, zum von Selektivität zu verbessern)
Einspritzungs-Volumen: µL 5
Laufzeit: 30 Minuten
Verfahren:
Bereiten Sie Referenzstandardlösungen und -Probenaufbereitungen vor, wie verwiesen.
Machen Sie eine einzelne Einspritzung von einem Extraktionslösungsmittelfreien raum.
Machen Sie einzelne Einspritzung von den Standardvorbereitungen.
Schaffen Sie einen Linearitätsplan von Standardhöchstbereichen gegen Standardkonzentrationen.
Machen Sie einzelne Einspritzungen von den Probenaufbereitungen.
Berechnen Sie die kavalactone Konzentration in der Probe.
System-Eignung:
Der Korrelationskoeffizient vom Linear-Regression muss ≥0.999 sein. Die Entschließung zwischen desmethoxyyangonin und yangonin Spitzen muss ≥1.8 sein.
Shaanxi-Y-Kraut-Biotechnologie Co., Ltd.